ІНСТРУКЦІЯ
ПО ВИЗНАЧЕННЮЗАЛІЗА ТА ЗАГАЛЬНОЇ ЗАЛІЗОЗВ''ЯЗУЮЧОЇ ЗДАТНОСТІ (3333 )
СИРОВАТКИ КРОВІ
Призначення
Набір застосовують длякількісного визначення заліза та загальної залізо-зв''язуючої здатності (3333)сироватки крові людини в клініко-діагностичних і біохімічних лабораторіях танауково-дослідницькій практиці.
Набір розрахований на 96 мікро-(фотометруємий об''єм 1,2 мл), 48 напівмікро-(фотометруємий об''єм 2,5 мл), 23макровизначень (фотометруємий об''єм 5 мл) заліза чи таку ж саму кількістьнапівмікро-, макровизначень 3333 з холостою і калібрувальною пробами.
Діапазон концентрацій заліза(чи 3333), що визначаються - (4-200) мкмоль/л.
Коефіцієнт варіації визначення - не більш, як 5%.
Зберігання набору - при температурі від плюс 2 до плюс 25 °С.
Строк придатності набору - 12 місяців від дати випуску (вказана на упаковці)
Набір призначений длязастосування ін вітро.
Склад набору
- буферний розчин (рН від 4,5 до5,0) - 1 флакон (100±4) мл;
- колірореагент (феррозин (20±2)г/л) - 1 пробірка (2±0,1) мл;
- калібрувальний розчин заліза(20±0,5) мкмоль/л
- (112±3) мкг% - 1 флакон (8±О,5) мл;
- насичуючий розчин заліза(90±10) мкмоль/л - 1 флакон (50±2) мл;
- сорбент (лужний карбонатмагнію) - 1флакон (Ю±1) г;
- деіонізованавода - 1 флакон (8+0,5) мл.
Матеріал для аналізу
Сироватка, гепаринізованаплазма.
Не застосовувати ЕДТО,оксалатну та цитратну плазму. Не застосовувати мутну (ліпемічну) чи гемолітичнусироватки - можливо отримання завищених результатів. Концентрація залізастабільна на протязі 4 діб при кімнатній температурі.
Обладнання
1. Фотометричне обладнання, здатневимірювати оптичну щільність розчинів в діапазоні (0-1) од при довжині хвилі(530-590) нм (максимум поглинання при 562 нм) та довжині оптичного шляху 1 або0,5 см.
2. Пробірки об''ємом 10 мл (ГОСТ1770-74Е).
3. Піпетки об''ємом 1, 0,1 та 5 мл(ГОСТ 29227-91).
4. Центрифуга для пробірок(швидкість від 2000 до 5000 об/хв).
Визначення концентраціїзаліза в сироватці (плазмі) крові
Принцип методу
Залізо звільняється ззалізозв''язуючих пептидів сироватки крові та відновлюється завдяки діїгуанідину та гідроксиламіну. Натрієва сіль3-(2-піріділ)-5,6-біс(4-сульфофеніл)-1,2,4-триазину (феррозину) дає з іонами Fe+2комплекс фіолетового кольору. Оптична щільність дослідного розчину пропорційнаконцентрації заліза в пробі.
Склад реакційного розчину впробі
Феррозин > 1,10 ммоль/л;тіосечовина - 11,90 ммоль/л; гуанідину гідрохлорид -3,75 моль/л; гідроксиламінугідрохлорид >60 ммоль/л; гліцин, НС1 - 0,2 моль/л.
Приготування робочихрозчинів
Розчини готові та придатні довикористання після відкупорювання флаконів протягом місяця при зберіганні від+2 до +8°С.
Проведення аналізу
Аналіз проводиться згідно зісхемою представленою у таблиці 1.
Таблиця 1
| Відміряти у кювету, мл
| Дослідна проба
| Калібрув. проба
| Холоста проба
|
| Мікро-аналіз
| Напів-мікро-аналіз
| Макро-аналіз
| Мікро-аналіз
| Напів-мікро-аналіз
| Макро-аналіз
| Мікро-аналіз
| Напів-мікро-аналіз
| Макро-аналіз
|
| Буферний розчин
| 1,0
| 2,0
| 4,0
| 1,0
| 2,0
| 4,0
| 1,0
| 2,0
| 4,0
|
| Сироватка (плазма)
| 0,2
| 0,5
| 1,0
| -
| -
| -
| -
| -
| -
|
| Калібрувальний розчин
| -
| -
| -
| 0,2
| 0,5
| 1,0
| -
| -
| -
|
| Деіонізована вода
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| 0,2
| 0,5
| 1,0
|
| Вимір, оптич. щільність
| Едосл
| Екал
| -
|
Витримують 5-10 хв. прикімнатній температурі, виміряють оптичну щільність дослідної (Едосл) ікалібрувальної (ЕКдл) проб проти холостої. Фотометрування - див.Розділ "Обладнання".
| Колірореагент
| 0,02
| 0,04
| 0,08
| 0,02
| 0,04
| 0,08
| 0,02
| 0,04
| 0,08
|
| Вимір, оптич. щільність
| Едосл''
| Екал''
| -
|
Перемішують, витримують 15-20хв., виміряють оптичну щільність дослідної (Едосл'') і калібрувальної (ЕКдл'')проб проти холостої з колірореагентом.
Розрахунок результатів
СзАЛІЗА = СкАЛІБРАТОРА *(Едрсл''-ЕдрСл)/(ЕкАл''-ЕкАл) (1)
де: Сзаліза - концентрація заліза в пробі (мкмоль/л чи мкг%);
Скалібратора- концентрація заліза вкалібрувальному розчині (20 мкмоль/л
чи 112мкг%); Едосл, ЕдОсл'',Екал , ЕКал'' - оптичні щільності розчинів (див. таблицю1).
Нормальні показники вмістузаліза в сироватці
-Чоловіки: (9,5 - 29,9) мкмоль/л чи (53 - 167) мкг%
- Жінки: (8,8 - 27,0) мкмоль/л чи (49 -151) мкг%
- Новонароджені: (17,8-44,8)мкмоль/л чи (100 - 250) мкг%
- Немовля: (7,2 - 17,9) мкмоль/л чи (40 - 100) мкг%
- Діти віком до 14 років: (9,0 -21,5) мкмоль/л чи (50 - 120) мкг%
Визначення загальноїзалізозв''язуючої здатності сироватки крові (3333)
Принцип методу
Трансферин в непатологічнихсироватках зв''язує іони заліза до 1/3 свого об''єму. Для насичення трансферинусироватку обробляють надлишковою кількістю іонів Fe+3. Від незв''язаних іонів заліза розчин звільняють за допомогою карбонату магнію. Визначаючиконцентрацію заліза в насиченій сироватці, знаходять її загальнузалізозв''язуючу здатність (3333) чи ТІВС. Різність між 3333 та залізом всироватці крові - це ненасичена залізозв''язуюча здатність (НЗЗЗ) сироватки чиUIBC.
Проведення аналізу Аналіз проводиться згідно зі схемою,представленою у таблиці 2.
Таблиця 2
| Відміряти у пробірку, мл
| Напівмікроаналіз
| Макроаналіз
|
| Насичуючий розчин заліза
| 1,0
| 2,0
|
| Сироватка (плазма)
| 0,5
| 1,0
|
Перемішують вміст пробірок та витримуютьїх (5-6) хв. при кімнатній температурі (від плюс 20 до плюс 25 °С).
| Сорбент
| (0,1-0,2) г (близько 0,5 мл)
| (0,2-0,4) г (близько 1,0 мл)
|
Внести у пробірку сорбент вприблизній кількості згідно з таблицею. Тримають (5-10) хв. при кімнатнійтемпературі (від плюс 20 до плюс 25 °С), збовтуючи кожні (2-3) хв.Центрифугують (9-Ю) хв. (2000 -5000 об/хв.) та проводять визначенняконцентрації заліза в супернатанті. Визначення проводять згідно з таблицею 1, зсупернатантом замість сироватки.
Розрахунок результатів
Концентрацію заліза всупернатанті (знайдену за формулою 1) необхідно помножити на коефіцієнтрозведення - 3. Отриманий результат означає 3333 (ТІВС). Для розрахункуненасиченої залізозв''язуючої здатності, НЗЗЗ, сироватки (UIBC), із знайденогозначення 3333 вилучають концентрацію заліза в сироватці чи плазмі крові.
% Насичення трансферину =Залізо у сироватці • 100/3333 (2)
Нормальні показники 3333-Дорослі: 280-400мкг% чи 50 - 72 мкмоль/л.
Нормальні показники НЗЗЗ
-Дорослі: 180-260мкг% чи 32 - 46 мкмоль/л.
Нормальні показники насиченнятрансферину - Чоловіки: 20 - 50 %
-Жінки: 15-50%
Контроль якості
Достовірність отриманогорезультату перевіряється за тестуванням контрольних сироваток «Ліонорм» (Чехія)чи «Біоконт С» (Росія).
Примітки
1 Інтерпретація отриманихрезультатів - див. Знциклопедия клинических лабораторних тестов, под редакциейН.У.Тица, стр. 570-571, «Лабинформ», Москва, 1997.
2 Кювети та лабораторний посуд,що використовується, повинні бути зовсім чистими та призначеними тільки дляаналізу заліза. Мити використаний посуд слід в 20% розчині соляної кислоти (хччи чда) або "хромовою" рідиною. Вимитий посуд ретельно полощутьдеіонізованою чи бідистильованою водою.
3 До складу набору (буфернийрозчин та розчини заліза) входять небезпечні хімічні компоненти. Припотраплянні розчинів на шкіру або слизову оболонку - треба негайно змити їхвеликою кількістю води.
УМОВИ ТА ТЕРМІН ЗБЕРІГАННЯ.
Зберігання набору - притемпературі від плюс 2 до плюс 25 °С.
Строк придатності набору - 12місяців від дати випуску (вказана на упаковці)