ІНСТРУКЦІЯ
для медичного застосування
Набір реактивів для визначення
концентрації сечовини в біологічних рідинах
Принцип методу
Сечовина з діацетилмонооксимому кислому середовищі в присутності тіосемікарбозиду та іонів трьохвалентногозаліза утворює забарвлений комплекс. Інтенсивність забарвлення пропорційнаконцентрації сечовини в пробі.
Дослідний матеріал
Свіжа сироватка крові аборазведена сеча. Сечу перед дослідженням фільтрують, розводять фізрозчином успіввідношенні 1:25-1:100 і результат множать на розведення.
Склад набору
1 .Реактив №1 - розчиндіацетилмонооксиму.
2.Реактив №2 - розчинтіосемікарбозиду та солі заліза.
3.Калібрувальний розчинсечовини 16,65 ммоль/л.
4.Сірчана кислота.
5.Трихлороцтова кислота 50%.
Характеристики набору
Лінійність до 25 ммоль/л.
Коефіцієнт варіації не більше5%.
Час інкубації 10 хв при 100°С.
Стабільність забарвлення не.менше 15 хв.
Приготування робочогорозчину
У колбу на 100 мл влити близько50 мл дистильованої води, кількісно додати вміст однієї ампули з реактивом №1та однієї ампули з реактивом №2. Перемішати й одразу довести дистильованою водоюдо мітки. Перелити в посуд для зберігання. Зберігати при +1°С-+5°С до 10 днів,у посуді із темного скла.
Розчин сірчаної кислоти
У колбу на 200 мл влити близько100 мл дистильованої води, кількісно додати вміст флакону із сірчаною кислотою.Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.
Розчин трихлороцтовоїкислоти (5% -й)
У колбу на 50 мл влити близько30 мл дистильованої води, кількісно додати вміст ампули з трихлороцтовоюкислотою. Перемішати і довести дистильованою водою до мітки. Розчин стабільний.
Проведення аналізу
Внести в пробірки досліджуванібіологічну рідину та реагенти згідно з таблицею, не порушуючи послідовності:
| Реагенти
| Дослідна проба,мл
| • Калібрувальна проба, мл
| Контрольна проба, мл.
|
| Робочий розчин Розчин сірчаної кислоти Сироватка крові або розведена сеча Калібрувальний розчин сечовини Дистильована вода
| 1
1
0,01
-
-
| 1
1
-
0,01
-
| 1 1
-
-
0,01
|
Реакційні суміші ретельно перемішують,закривають ковпачками з алюмінієвої фольги та інкубують протягом 10 хвилин накиплячій водяній бані. Після закінчення інкубації проби охолоджують підпроточною водою і вимірюють оптичну щільність дослідної і калібрувальної пробипроти контрольної проби в кюветах з товщиною поглинаючого шару 5 мм при довжиніхвилі 540 нм. Забарвлення стабільне протягом 15 хвилин після закінченняінкубації. Розраховують концентрацію сечовини за формулою:
Ед
С = • 16,65 [мМоль/л],
Екал
де Ед і Екал - екстинціїдосліджуваного зразка та калібрувального розчину, виміряні відносно контрольноїпроби.
При визначенні сечовини вліпімічній або гемолітичній сироватці пробу депротеїнізують 5%-ю трихлороцтовоюкислотою. Для цього 0,1 мл сироватки змішують з 1,0 мл трихлороцтової кислоти іцентрифугують. Таким же чином готують пробу з калібрувальним розчином сечовини.Для аналізу використовують 0,1 мл надосадової рідини. Використовуючитрихлороцтову кислоту, можна досліджувати і цілісну кров.
Нормальні значення:
для сироватки - 2,5÷8,3ммоль/л;
для сечі - 330÷580ммоль/доб.
Примітки.
1. Не порушуйте послідовності змішуванняреактивів: до робочого розчину спочатку додайте розчин сірчаної кислоти, тількипотім - досліджувану рідину.
2. Температура водяної бані повинна бути 100°С.
3. Якщо вміст сечовини в сироватці крові вище20 ммоль/л, сироватку розводять фізіологічним розчином, а результат множать нарозведення.
4. Ампули з розчином діацетилмонооксиму(реактив №1), з розчином трихлороцтової кислоти та флакон з сірчаною кислотоювідкривати у витяжній шафі.
5. При великій кількості досліджень дляприготування робочого розчину використовують відразу дві ампули з реактивом №1і дві ампули з реактивом №2, розчиняючи їх у 200 мл дистильованої води.
6. При малій кількості дослідженьрекомендується окремо розчинити ампулу з реактивом №1 і реактивом №2 у 50 млводи кожну і зберігати розчини в посудинах із темного скла до двох місяців.Робочий розчин готувати, змішуючи ці розчини в рівних пропорціях.
Термін і умови зберігання
Реактиви, з яких складаєтьсянабір, зберігаються при температурі +1-+5°С. Термін придатності набору 12місяців від дня виготовлення. Не застосовувати після закінчення термінупридатності.