ІНСТРУКЦІЯ
ПО ФОТОМЕТРИЧНОМУВИЗНАЧЕННЮ ЗАГАЛЬНОГО КАЛЬЦІЮ В БІОЛОГІЧНИХ РІДИНАХ
СКЛАД НАБОРУ
1. Хромоген - 1 флакон (120±4) мл;
о-крезолфталеїн комплексон - (0,12 ±0,01) ммоль/л
8-оксіхінолін - (16,0 + 0,16) ммоль/л
хлористоводнева кислота - (60,0 ± 6,00) ммоль/л
2. Буфер - 1 флакон(120±4) мл;
Моноетаноламін - (0,8 ± 0,08) моль/л
3. Калібрувальний розчин кальцію (2,5 ± 0,05)ммоль/л
чи (10 ± 0,2) мг% - 1 флакон (5±0,5) мл.
ПРИЗНАЧЕННЯ
Набір призначений длякількісного визначення загального кальцію в біологічних рідинах вклініко-діагностичних та біохімічних лабораторіях, науково-дослідницькійроботі.
Набір розраховано на ПОнапівмікро- (фотометруємий об''єм 2 мл), 44 макровизначень (фотометруємий об''єм5 мл) загального кальцію (з урахуван-ням холостих та калібрувальних проб).
Діапазон концентрацій кальціющо визначаються - 0,125-4 ммоль/л чи 0,5-16 мг%.
Коефіцієнт варіації у серії -не більш як 3%.
Набір призначено длязастосування ін вітро.
ПРИНЦИП МЕТОДУ: Іони кальцію в лужному середовищі реагують зо-крезолфталеїн комплексоном і утворюють кольоровий комплекс. Інтенсив-ністьфіолетового кольору комплексу пропорційна концентрації кальцію в досліднійпробі.
МАТЕРІАЛ
Сироватка, натще; брати кровпри мінімальному передавленні вени, без напруження м''язів чи після відновленнякровообігу впродовж 1 хвилини.
Плазма. Як антикоагулянтнеобхідно застосовувати тільки гепарин. Інші речовини, такі як ЕДТО, оксалат,фторид, цитрат заважають визначенню кальцію.
Сеча, добова. Збирати вємність, що містить 10 мл НС1, 6 моль/л, або підкислити після збору дорН<2,0 для розчинення солей Са.
Спиномозкова рідина (СМР).
УСТАТКУВАННЯ
1. Фотометричне устаткування, що забезпечує виміроптичної щільності при 570 (550-590) нм у діапазоні (0-1,0) од. Кювета здовжиною оптичного шляху 5 або 10 мм.
2. Пробірки об''ємом 10 мл (ГОСТ 1770-74Е).
3. Піпетки об''ємом 0,1 і 5 мл (ГОСТ 29227-91).
ГОТУВАННЯ РОБОЧИХ РОЗЧИНІВ
Для варіанта аналізу звикористанням БІРЕАГЕНТУ всі розчини готові для роботи. Придатні для роботи дозакінчення терміну зазначеного на упаковці, за умови збереження при температурівід плюс 2 до плюс 8 °С.
Для варіанта аналізу звикористанням МОНОРЕАГЕНТУ змішати рівні об''єми буфера і хромогену. МОНОРЕАГЕНТпридатний для роботи 2 дні при температурі від плюс 15 до плюс 25 °С або 4 дніпри температурі від плюс 2 до плюс 8 °С (за умови його збереження впластиковому посуді).
ПРОВЕДЕННЯ АНАЛІЗУ
Аналіз проводиться у відповідності зі схемою поданоїв таблиці.
| Варіант аналізу
| Відміряти в кювету, мл
| Холоста проба
| Калібрувальна проба
| Дослідна проба
|
| Напівмікро аналіз
| макроаналіз
| Напівмікро аналіз
| макроаналіз
| Напівмікро аналіз
| макроаналіз
|
| монореагент
| Монореагент
| 2,00
| 5,00
| 2,00
| 5,00
| 2,00
| 5,00
|
| Матеріал
| -
| -
| -
| -
| 0,02
| 0,05
|
| Калібрувальний р-н
| -
| -
| 0,02
| 0,05
| -
| -
|
| біреагент
| Хромоген
| 1,00
| 2,50
| 1,00
| 2,50
| 1,00
| 2,50
|
| Матеріал
| -
| -
| -
| -
| 0,02
| 0,05
|
| Калібрувальний р-н
| -
| -
| 0,02
| 0,05
| -
| -
|
| Буфер
| 1,00
| 2,50
| 1,00
| 2,50
| 1,00
| 2,50
|
| Змішують і витримують (10±1) хв. при кімнатній температурі (від плюс 20 до плюс 25°С). Вимірюють (не пізніше (30+5) хв.) оптичну щільність дослідної проби (Едослід.) і калібрувальної проби (ЕкалібР.) проти холостої проби. Фотометрирування - див. розділ "Устаткування".
|
| | | | | | | | | |
РОЗРАХУНОК РЕЗУЛЬТАТІВ
Кальцій (ммоль/л) = 2,5 • ЕДОСЛіД,/Екалібі), або
КаЛЬЦІЙ(МГ%) = 10 • Едрслід/Екалібр.
Для розрахунку концентраціїкальцію у добовій сечі отримане вище значення (ммоль/л) множать на об''ємдобової сечі виражений у л (одержують ммоль/добу), або значення (мг %) множатьна об''єм добової сечі виражений в л та коефіцієнт 10 (одержують мг/добу).
РЕФЕРЕНТНІ МЕЖІ *
| Сироватка або плазма, норма
| мг/100 мл
| (мг %) ммоль/л
|
| - Кров з пуповини:
| 8,2-11,2
| 2,05 - 2,80
|
| - Недоношені:
| 6,2-11,0
| 1,55-2,75
|
| - 0-10 діб:
| 7,6 - 10,4
| 1,90-2,60
|
| - 10 діб - 24 місяці:
| 9,0-11,0
| 2,25 - 2,75
|
| - 24 місяці - 12 років:
| 8,8-10,8
| 2,20 - 2,70
|
| - 12-18 років:
| 8,4-10,2
| 2,10-2,55
|
| - 18-60 років:
| 8,6-10,0
| 2,15-2,50
|
| - 60-90 років:
| 8,8-10,2
| 2,20-2,55
|
| - старше ніж 90 років:
| 8,2- 9,6
| 2,05 - 2,40
|
| СМР, норма
| мг/ 100 мл (мг %)
| ммоль/л
|
| -
| 4,2- 5,4
| 1,05-1,35
|
| Сеча, добова, норма
| мг/добу
|
| ммоль/добу
| | |
| - Відсутність Са у дієті:
| | 5-40 0,13
|
| 1,00
| | |
| - Споживання Са нижче середнього рівня:
| 50-150 1,25
|
| 3,75
| | |
| - Середній рівень споживання Са:*
| 100 - 300 2,50
|
| 7,50
| | |
* - Середній рівень споживанняСа - 800 мг/добу (20 ммоль/добу).
КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ
Для оцінки правильностівизначення придатні контрольні сироватки, атестовані даним методом (Ліонорм У,Ліонорм П, Біоконт С).
ПРИМІТКИ
1. Об''єми розчинів можно пропорційно змінити,зберігаючи співвідношення монореагент : зразок = 100 : 1, або хромоген: буфер : зразок = 50:50:1.
2. Якщо концентрація кальцію в зразку перевищує4 ммоль/л його розбавляють у співвідношенні 1:1 дистильованою водою. Отриманийрезультат множать на 2.
3. Кювети і посуд, що використовуються прианалізі повинні бути цілком чистими, спеціально підготовленими, тобтозамоченими на декілька годин у НС1 (концентрація біля 2 моль/л), а потімретельно промитими.
4. Значення загального Са в СМР тісно корелюютьіз концентрацією іонізованого Са в сироватці. СМР не віддзеркалює змін рівня Сав сироватці при гіпопаратиреозі. Збільшення рівня загального й іонізованого Сав СМР зустрічається при станах, що супроводжуються підвищенням вмісту білка вСМР6).
5. Медикаментозні субстанції що підвищуютьрівень кальцію в сироватці крові: лужні антациди, андрогени, солі Са,калюстерон, даназол, діетилстильбестрол (швидке підвищення за 24 години ухворих раком молочної залози), дігідротахистерол, постійне застосуваннядіуретинів (включаючи хлоталідон, етакринову кислоту, фуросемід, тіазиди),ергокальциферол, ізотретиноін, літій, прогестерон, парат-гормон, тамоксифен,тестолактон, вітамін Д, вітамін А \
6. Медикаментозні субстанції що знижують рівенькальцію в сироватці крові: альбутерол, альпростадил, аміноглікозиди (наприклад,гентаміцин), аспарагіназа, барбітурати у літніх людей, кальцитонін,карбамазепін, карбенолоксон, карбоплатин, кортикостероїди; діуретини (пусковийефект), включаючи ацетазоламід, етакринову кислоту, фуросемід; естрогени (післяпочатку менопаузи), флориди, гастрин, глюкагон, глюкоза, індапамід, інсулін,ізоніазід, проносні (при надмірному вжитку), солі магнію, метицилін, фенітоїн,фосфати, плікаміцин, ізотонічний розчин хлориду натрію (при гіперкальціємії),тетрациклін (у вагітних)6).
7. Визначенню заважають: (занижують результат)фториди, оксалати, цитрати, ЕДТО, сульфати; (завищують результат) солі Са(можливе забруднення дист. води або посуду), хлорпропамід, жирові емульсії.Найнижчі значення Са в сироватці протягом доби спостерігаються в 02.00 - 04.00,найвищі - у 20.00. Вертикальне положення протягом 15 хвил. викликає підвищеннярівня Са на 4 - 7 % (мінімальна зміна рівня іСа). Загальна концентрація Са всироватці залежить від концентрації білка. При зміні останньої на 1 г/100 мл(10 г/л) відбувається рівнобіжна зміна концентрації Са на приблизно 0,8 мг/100мл (0,2 ммоль/л). Помилкове підвищення рівня Са в сироватці може бути обумовленовенозним стазом при відбиранні проби і тривалому збереженні крові. У зв''язку зтим, що солі Са осаджуються на склі, необхідно використовувати ретельнопідготовлені шприци, контейнери і скляний посуд. Для діагностикигіперпаратиреозу необхідні повторні дослідження, оскільки часом рівеньзагального Са знаходиться в межах норми, а іСа підвищений. При зниженні рівняСа нижче 6,0-7,0 мг% (1,5-1,75 ммоль/л) може розвитися тетанія, а приметаболічному і респіраторному алкалозі тетанія може виникати при нормальномурівні загального Са в сироватці (але низькому іСа)6).
УМОВИ ТА ТЕРМІН ЗБЕРІГАННЯ.
Зберігання набору - притемпературі від плюс 2 до плюс 8 °С.
Строк придатності набору - 12місяців від дати випуску (вказана на упаковці)