Інструкція
длямедичного застосування
Дисківз антибіотиками для визначення чутливості
мікроорганізмівдо лікарських засобів
Загальна характеристика
Диски з антибіотикамивикористовуються для визначення чутливості до антибіотиків збудниківінфекційних захворювань, виділених з патологічного матеріалу хворих.
Диски виготовлені з картону, якийнаділений спеціальними властивостями та насичений стандартними розчинамиантибіотиків визначеної концентрації. Вміст антибіотика у диску, який вказанийна етикетці, відповідає рекомендаціям ВООЗ. Для запобігання насиченню вологоюдисків у флакони поміщені: вата гігроскопічна та силікагель технічнийіндикаторний синього кольору.
Методика визначення чутливості
1. Поживне середовище
Для визначення чутливості рекомендовановикористовувати поживний агар для визначення чутливості мікроорганізмів доантибіотиків ( середовище АГВ) із вмістом триптичного гідролізату кільки 25,0г/л, крохмалю розчинного 0,5 г/л, натрію фосфорнокислого двозаміщенного 1,0г/л, агару 13,5 г/л при рН-7,4+0,2.
Для гемофільних мікроорганізмів,які не ростуть на звичайному поживному середовищі, у вказане вище поживнесередовище добавляють 5 % дефібрінованої або гемолізованої крові.
2. Приготування чашок
Розплавлене середовище розливаютьпо 15 мл у стерильні чашки Петрі, діаметром 100 мм, розташованих нагоризонтальній поверхні. Перед зараженням поверхню застиглого середовищапідсушують протягом 30- 40 хвилин.
3. Приготування інокулята тананесення його на поверхню агарового середовища
Інокулят готують із чистої18-20-годинної культури бактерій, які виросли на поверхні щільного поживногосередовища. Для цього 5-10 ізольованих колоній суспензують у рідкому поживномусередовищі або в ізотонічному розчині хлориду натрію. Як інокулят можна використовуватичисту 18- 20 годинну бульйонну культуру. Суспензію або бульйонну культурурозводять ізотонічним розчином хлориду натрію до каламутності оптичногостандарту на 10 ОД, а потім отриману суміш розводять ще повторно у 20 разів.
Інокулят, загальним об”ємом 1 мл,наносять на поверхню агарового середовища і рівномірно розподіляють шляхом їїпохитування. Залишок рідини видаляють піпеткою. Напіввідкриті чашки Петріпідсушують при кімнатній температурі протягом 10- 15 хвилин.
4. Накладання дисків
Диски за допомогою пінцетарозміщують на поверхні зараженого поживного середовища на однаковій відстаніодин від одного та приблизно на відстані 2 см від краю чашки. На одній чашціПетрі необхідно розміщувати не більше 5 дисків.
5. Інкубація чашок
Чашки інкубують у термостатіпротягом 18- 20 годин, при t 35-37 оС, з перевернутим до- гори дном.
6. Облік результатів
За допомогою лінійки або вимірювача(кронциркуля, штангенциркуля) проводять вимір діаметра зони затримки ростудовкола дисків, включаючи при цьому діаметр самих дисків з точністю до 1 мм.При не різко окреслених краях зон або зонах з подвійними контурами необхіднопроводити вимір зони по найбільш чіткому контуру.
7. Інтерпретація отриманихрезультатів
Оцінка результатів проводиться згідноз табл.1, яка містить граничні розміри зон затримки росту для нечутливих,помірно чутливих та чутливих штамів.
Отримані результати (за діаметромзони затримки росту) порівнюють з граничними значеннями в табл.1 після чогорозподіляють штами, що вивчаються, на три категорії чутливості.
8. Контроль відтворення та точностіотриманих результатів
Для контролю відтворення таточності процедури визначення чутливості мікроорганізмів до лікарських засобівнеобхідно на кожну постановку теста паралельно з випробованими штамамивикористовувати еталонні штами: Staphylococcus aureus (ATCC 25923),Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853).
Діаметри затримки зон ростуеталонних штамів повинні відповідати даним, викладеним у табл. 2.
Еталонні штами використовують дляперевірки якості дисків, поживного середовища та правильності методикипостановки теста.
Умови та термін зберігання. Зберігати у сухому,захищеному від світла місці, при температурі від +4 до +8 оС. Термінпридатності 1 рік.