ІН С Т P У К Ц І Я
длямедичного застосування набоpу pеактивів для визначення
серомукоїдіву біологічних рідинах турбідиметричним методом
Пpинцип: білки осаджують хлорноюкислотою та вилучають центрифугуванням; мукоїди, що залишаються в супернатанті,осаджують фосфорновольфраматом. За ступенем помутніння розчину визначають вмістсеромукоїдів у дослідному матеріалі. Для побудови калібрувального графікавикористовують сульфат барію, що утворюється в результаті взаємодії хлоридубарію та сірчаної кислоти.
Склад набору
1. 1,8Н розчинхлорної кислоти - 20 мл.
2. 5% розчинфосфорновольфрамової кислоти в 2Н розчині соляної кислоти - 9,5 мл.
3. 0,3Н розчинсірчаної кислоти - 10 мл.
4. 0,01Н розчинхлориду барію - 2,5 мл.
Приготування робочих розчинів
1. Робочийрозчин хлорної кислоти.
Кількісно перенести 20 мл хлорноїкислоти в мірну колбу на 100 мл, довести до мітки дистильованою водою,перемішати.
2. Розчинфосфоровольфрамату.
У мірний циліндр на 50 мл кількісноперенести вміст флакона з суспензією фосфорновольфрамової кислоти і довести домітки “40” дистильованою водою, перемішати.
3. Розчинхлористого барію.
Із ампули піпеткою відібрати точно2 мл розчину і внести в мірну колбу на 50 мл, довести до мітки дистильованоюводою, перемішати.
4. Розчинсірчаної кислоти. Розчин готовий до роботи.
Проведення аналізу. 0,5 мл сироватки змішують з4,5 мл фізіологічного розчину і додають по краплях 2,5 мл розчину хлорноїкислоти. Вміст пробірки добре перемішують скляною паличкою, залишають на 10 хвпри кімнатній температурі, центрифугують 15 хв при 2500 – 3000 об/хв.
Відміряють 5 мл центрифугата,додають 1 мл розчину фосфоровольфрамату і через 15 хв вимірюють мутність пробина фотоелектричному колориметрі в кюветі з товщиною шару 10 мм при довжиніхвилі 630–640 нм (червоний світлофільтр) проти контрольної проби, в яку замістьсироватки вносять 0,5 мл фізіологічного розчину.
Побудова калібрувальногографіка. Змішуютьрозчини згідно з таблицею, струшують і відразу вимірюють екстинцію нафотоелектроколориметрі, будують калібрувальний графік.
| Відносні одиниці мутності
| 1
| 2
| 3
| 4
| 5
| 6
| 7
| 8
|
| Розчин хлориду барію (мл)
| 0,1
| 0,2
| 0,3
| 0,4
| 0,5
| 0,6
| 0,7
| 0,8
|
| Дистильована вода (мл)
| 4,9
| 4,8
| 4,7
| 4,6
| 4,5
| 4,4
| 4,3
| 4,2
|
| Розчин сірчаної кислоти (мл)
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
| 1,0
|
Розрахунок результатів. Розрахунок вмістусеромукоїдів визначають за калібрувальним графіком, побудованим на основіколориметрування суспензії сульфату барію в відносних одиницях мутності.
Нормальні значення серомукоїдів: 0-5відносних одиниць мутності, або 0,130- 0,200 умовних одиниць оптичноїщільності, що відображають різницю екстинції проби та екстинції контрольноїпроби. В останньому випадку калібрувальний графік не використовують.
Умови зберігання. Реактиви з яких складається набірзберігаються при температурі +1+5ºС.
Термін придатності. Вказаний на упаковці.
ПРИМІТКА: центрифуги з обертамименше ніж 2500 за хвилину не дозволяють відокремити осад білків від мукоїдів, томупісля центрифугування на низьких обертах центрифугат фільтрують через паперовийфільтр (синя смужка).